徐州市第一实验幼儿园始建于1957年，原是徐州市地委办公室筹建的服务于县区基层革命干部子女的“地区机关幼儿园”。1983年地、市合并期间，更名为徐州市机关第一幼儿园；寄宿制改为全日制；曾先后隶属于市机关事务管理局、市政府办公室。1981年被江苏省教委命名为首批“省示范幼儿园”，2004年被命名为“江苏省三星级示范性实验幼儿园”。2012年在市政府、市教育局各级领导的关心下，先后投入3000多万对一实幼进行了原址重建；同年，幼儿园更名为徐州市第一实验幼儿园。

2014年4月一实幼新园投入使用。全园共15个班级。各功能室齐全，现代化教学设备配备完善，拥有容纳200余人的多功能厅及120平方米的录播教室。同时，拥有一支师德高尚、理念先进、素质精良、具有团队精神的创新型、示范型、研究型的教师队伍。教师群体100%达到大专及以上学历，其中特级教师2人、名校长1人、市级学科带头人4人，区级名教师及学科带头人4人。是“江苏省前瞻性教育改革实验项目学校”“江苏省融合教育示范校“江苏省教科研工作先进集体”“江苏省科学教育综合示范学校”“徐州市教育系统先进集体”“徐州市学校教育先进单位”“徐州市平安校园示范校”“徐州市依法治教示范校”“徐州市幼儿发展研究中心”“徐州市特殊教育先进集体”“徐州市教育系统先进基层党组织”“国培计划—幼儿园教师培训项目实践基地”等多项命名和荣誉称号，成为徐州市幼教系统对外交流的“窗口”之一。